正染色和负染色的区别

正染色和负染色的区别,第1张

正染是强化标本的结构,即染色剂与样品结合,增强其散射电子的能力,最终在荧光屏上形成正象。负染是将标本包埋在染色物质里,借助染色剂增强背景对电子散射的作用,而标本在荧光屏上形成暗背景下的亮。

负染色法(Negative stain)是一种染色方法,常用于不透光液体标本的镜检。由于其染色处理过程并非针对菌体本身,故又称“衬托染色法”、“间接染色法”。在负染色法中,标本不需要热固定,细胞不会因为化学药物的影响而变形,对于不易染色的细菌或病毒也能观察。

染色原理

负染色法需要使用酸性染料来染色,如伊红或苯胺黑。因为细菌体表面带负电,而酸性染料的色原也带负电,所以色原只能将背景染色,才能使没有染色的细胞很容易的被观察到。

一些染色剂,如四氧化锇和铁氰化锇,化学活性非常强。作为强氧化剂,它们主要与交键类脂和不饱和碳碳键反应,从而改变样本组织的生物膜特性并将其染色。

就透射电子显微镜来说,原子所带电子的不透明度与其原子序数有关,也就是和核外电子数有关。所以应选择有较强的电子散射能力且易被生物吸附的试剂作为负染色剂,一些常用的负染色剂有钼酸铵、乙酸铀酰、甲酸铀酰(英语:Uranyl formate)、磷钨酸、四氧化锇、锇铁氰化钾等[2]。使用负染色法可以看到普通光学显微镜下无法看清的结构。该方法主要用于观察病毒、细菌、细菌鞭毛、生物膜等结构,这些结构的电子散射能力均较低[3]。

负染色法(negative staining)染色处理过程主要并非针对菌体本身,故又称“衬托染色法”。是一种易于在电子显微镜下观察试样的微细结构的方法。它是用磷钨酸钠、醋酸氧铀等电子密度高的物质,嵌入生物试样的间隙,根据产生的对比进行观察,而非原来意义上的物质染色。它与通常在电子显微镜中所得的阳面物像不同,而是阴面物像,因而有此名称。解像力可达0.5微米以下。

最早由S.Brenner和R.Horne,(1959)用于 ,以后利用此法很快地积累了病毒、细菌以及分层蛋白质的微细结构等方面的知识。

负染色法需要使用酸性染料来染色,如伊红或苯胺黑。因为细菌体表面带负电,而酸性染料的色原也带负电,所以色原只能将背景染色。没有染色的细胞在染色背景下就能很容易的观察到。在负染色法中,标本不需要热固定,细胞不会因为化学药物的影响而变形,对于不易染色的细菌或病毒也能观察。

负染色法 此种染色法之染色处理过程主要并非针对菌体本身,故又称「间接染色法」。 所用之染剂系因阴离子呈色,所以无法对同样带阴电荷之菌体细胞呈色,而于染色处理时会在细胞周围形成沉淀,这种情形即称为阴性或间接染色。又称背景染色法


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